INTRODUKSJON: En av de viktigste prognostiske faktorene ved opererbar brystkreft er påvisning av tumor celler til lymfeknutene. Det er imidlertid et problem at 20-40% av pasientene som blir karakterisert som lymfeknyte-negative ved konvensjonell mikroskopisk påvisning, og som på bakgrunn av dette ikke får tilbud om kjemoterapi etter operasjon, allikevel opplever å få tilbakefall av sykdom. Dette indikerer at det finnes en hematogen spredningsvei, der tumor cellene entrer blodbanen direkte, i tillegg til den lymfatiske spredningsveien. Flere større studier har vist at tilstedeværelse av såkalte disseminerte tumor celler (DTCs) til beinmargen (BM) er assosiert med tilbakefall av sykdom, og lavere overlevelse. DTCs i BM hos brystkreft pasienter har også blitt vist å inneholde en stor subpopulasjon av celler med såkalte stamcelle-lignende egenskaper. Slike celler antas å spille en sentral rolle i kreftutviklingen. Formålet ved dette prosjektet har hovedsakelig vært å finne sensitive molekylære markører for påvisning av DTCs i BM. Vi har imidlertid også fokusert på påvisning av sirkulerende tumor celler (CTCs) i blod og plasma fra pasienter med opererbar brystkreft siden det er enklere, og mindre smertefullt for pasienten, å avgi en blodprøve istedenfor en BM-prøve.METODE: Strategien vår er å påvise DTCs og CTCs indirekte ved kvantitering av surrogat markører ved real-time PCR. 191 pasienter rekruttert fra 1998-2000 er inkludert i studien. Vi har en median oppfølgingstid på 98 mnd (>8 år). Blod og BM-prøver ble tatt før operasjon, 3 uker etter operasjon og 6 måneder etter operasjon.RESULTATER: 1) Vi har undersøkt den prognostiske verdien av 6 ulike mRNA markører (CK19, hMAM, TFF-1, PDEF, maspin og TWIST1) i pre-operative BM prøver. Av de 6 mRNA markørene som ble undersøkt gav forhøyet nivå av 4 markører prognostisk informasjon i BM. 2) Basert på overlapp mellom 2 av markørene konstruerte vi en multimarkør (MM) bestående av CK19, hMAM og TWIST1 i denne studien. 30/191 (16%) pasienter hadde forhøyet nivå av minst en mRNA markør i BM. Av disse fikk 12 (40%) pasienter systemisk tilbakefall innen median 98 mnd (>8 års) oppfølging. MM predikerte tilbakefall av systemisk sykdom og overlevelse. 3) I denne studien undersøkte vi MM statusen i BM-prøver tatt 3 uker (BM2) og/eller 6 måneder (BM3) etter operasjon hos 154 pasienter. 23/154 (15%) pasienter var DTC-positive i BM-prøvene tatt etter operasjon. Av disse fikk 10/23 (44%) pasienter med persistente DTCs i BM systemisk tilbakefall innen 98 mnd (>8 år) median oppfølging, sammenlignet med 12% blant de uten persistente DTCs. 8 av disse 10 (80%) pasientene døde som følge av sykdoms tilbakefall. Univariat Cox-regresjon viste at DTC påvisning ved alle prøvetidspunktene var sterke faktorer for prediksjon av systemisk tilbakefall. Men påvisning av DTCs i BM`en både før og etter operasjon var en spesielt sterk risikofaktor (HR=9.95). 4) I den siste studien har vi undersøkt om pre-operativ påvisning av DTCs i BM og CTCs i blod og plasma ved bruk av mikroRNA (miRNA) gir prognostisk informasjon, og om miRNA kan brukes som biomarkør for tidlig påvisning av brystkreft. Totalt ble 12 miRNAs undersøkt som kandidat biomarkører. miRNA ekspresjonsprofileringen identifiserte 5 kandidat miRNA`er som var høyt uttrykt i tumor prøver sammenlignet med nivået i BM, blod og plasma fra friske kontroll personer. Ved videre validering ble imidlertid ingen statistisk signifikante assosiasjoner mellom BM, blod og plasma nivået for noen av miRNA`ene og klinisk utfall funnet ved analysering av 14 pasienter med tidlig brystkreft.